操作流程：
. 小鼠胚胎干細(xì)胞；ES-D3(CRL-934)品牌主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-43），co2孵箱（日本yamato it-6）。
.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
.2. 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動(dòng),使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預(yù)熱，8～0倍體積）離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以×05/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細(xì)胞48h換液次，細(xì)胞長(zhǎng)至60%～70%融合時(shí)，用0.25%消化～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散，為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細(xì)胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長(zhǎng)情況及形態(tài)特征。
.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞，待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液，用0×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù)，按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液＝(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×04。
.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生的細(xì)胞，以0.25％消化成單細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)后分別接種于2個(gè)25cm2培養(yǎng)瓶中，每?jī)尚r(shí)隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞，加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×00％，計(jì)算貼壁率。 
.6 生長(zhǎng)曲線 取指數(shù)生的細(xì)胞用消化制成單細(xì)胞懸液，以×04/孔接種于24孔板，每孔加入ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔，計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。連續(xù)計(jì)數(shù)0d，繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線

本公司提供的細(xì)胞都是現(xiàn)貨供應(yīng)，詳細(xì)小鼠胚胎干細(xì)胞；ES-D3(CRL-934)品牌說明書！

細(xì)胞名稱 小鼠胚胎干細(xì)胞；ES-D3(CRL-934)品牌
形態(tài)特性 球形克隆

生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)

特征特性 小鼠胚胎干細(xì)胞；在缺乏滋養(yǎng)層或條件培養(yǎng)基時(shí)，這株細(xì)胞自發(fā)分化成胚胎結(jié)構(gòu)。 它們可以注射回胚泡并參與形成生殖系。 未分化細(xì)胞可以通過基因靶向技術(shù)進(jìn)行基因改良。貼壁生長(zhǎng)；形成球形克隆。

培養(yǎng)條件 干細(xì)胞培養(yǎng)基

傳代方法

傳代情況 PN

凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS

支原體檢測(cè) 陰性

STR

同工酶

染色體

主要功能：
（）小鼠胚胎干細(xì)胞；ES-D3(CRL-934)品牌血管平滑肌細(xì)胞的再生能力是原發(fā)血管病變的重要因素。
（2）表達(dá)鈣通道及ICAM-和VCAM-，參與血管壁的炎癥反應(yīng)。
（3）與血管疾病的進(jìn)展和穩(wěn)定有關(guān)。
 生理變化：
（）主動(dòng)脈硬化。
（2）主動(dòng)脈瘤
（3）主動(dòng)脈鈣化。
基本特性：
（）小鼠胚胎干細(xì)胞；ES-D3(CRL-934)品牌組織來源于正常大鼠大動(dòng)脈組織。
（2）鑒定：肌動(dòng)蛋白，alpha-SMA和Desmin免疫熒光染色。
（3）原代細(xì)胞培養(yǎng)末期液氮凍存。
（4）每?jī)龃婀芗?xì)胞數(shù)：>5×05 cells/ml。
（5）肌動(dòng)蛋白，alpha-SMA和Desmin免疫熒光染色驗(yàn)證。
（6）不含有HIV-、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。

運(yùn)輸和保存：
小鼠胚胎干細(xì)胞；ES-D3(CRL-934)品牌視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
)mL凍存細(xì)胞懸液裝于.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，如無法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作，凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存?zhèn)€月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細(xì)胞較多，請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。
具體操作：
.預(yù)熱培養(yǎng)用液：把已經(jīng)配制好的裝有培養(yǎng)液、PBS液和的瓶子放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱。
2.用75％酒精擦拭經(jīng)過紫外線照射的超凈工作臺(tái)和雙手。
3.正確擺放使用的器械：保證足夠的*作空間，不僅便于*作而且可減少污染。
4.點(diǎn)燃酒精燈：注意火焰不能太小。
5.準(zhǔn)備好將要使用的消毒后的空培養(yǎng)瓶，放入微波爐內(nèi)高火，8分鐘再次消毒。
6.取出預(yù)熱好的培養(yǎng)用液：大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞取出已經(jīng)預(yù)熱好的培養(yǎng)用液，用酒精棉球擦拭好后方能放入超凈臺(tái)內(nèi)。
7.從培養(yǎng)箱內(nèi)取出細(xì)胞：注意取出細(xì)胞時(shí)要旋緊瓶蓋，用酒精棉球擦拭顯微鏡的臺(tái)面，再在鏡下觀察細(xì)胞。
8.打開瓶口：將各瓶口一一打開，同時(shí)要在酒精燈上燒口消毒。?

絡(luò)塞維 CAS 84954-92-7 訂購|咨詢  規(guī)格： HPLC≥98%，20mg/vial

槐角苷 CAS 52-95-4 訂購|咨詢  規(guī)格： 20mg

松葉對(duì)照藥材 CAS  訂購|咨詢  規(guī)格： g

橙黃Ⅱ;Orange Ⅱ CAS 633-96-5 訂購|咨詢  規(guī)格： 20mg

茶氨酸 CAS 308-6-6 訂購|咨詢  規(guī)格： 20mg

念珠菌顯色對(duì)照培養(yǎng)基 CAS  訂購|咨詢  規(guī)格： 4.8g/00ml

哈奈德 CAS 3093-35-4 訂購|咨詢  規(guī)格： 00mg

貝母堿;Imperialine CAS 6825-98-7 訂購|咨詢  規(guī)格： 20mg

柚皮苷查爾 CAS 73692-50-9 訂購|咨詢  規(guī)格： HPLC≥98%;20mg

九里香 CAS 9668-69-0 訂購|咨詢  規(guī)格： 20mg

酸棗仁皂甙A; 酸棗仁皂苷A CAS 55466-04- 訂購|咨詢  規(guī)格： HPLC≥98%,20mg/支

對(duì)羥基苯乙酯 CAS 20-47-8 訂購|咨詢  規(guī)格： GC≥99%;00mg

小鼠胚胎干細(xì)胞；ES-D3(CRL-934)品牌MCT  單羧酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白-抗體 規(guī)格: 0.2mlPhospho-Histone H3 (Ser0)  磷酸化組蛋白H3抗體 規(guī)格: 0.ml

Connexin-37/GJA4  間隙連接蛋白37抗體 規(guī)格: 0.ml

Rabbit Anti-mouse IgM/PE-Cy3  PE-Cy3標(biāo)記的兔抗小鼠IgM 規(guī)格: 0.ml

C20orf32  20號(hào)染色體開放閱讀框32抗體 規(guī)格: 0.2ml

CCDC60  卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白60抗體 規(guī)格: 0.2ml

Phospho-HSP90 alpha (Thr5/7)  磷酸化熱休克蛋白90α抗體 規(guī)格: 0.ml

Rabbit anti-mouse Kappa light chain/PE  PE標(biāo)記的兔抗小鼠k鏈 規(guī)格: 0.mlART3  二磷酸苷核糖基轉(zhuǎn)移酶3抗體 規(guī)格: 0.2ml

Lamin B Receptor  核纖層蛋白B受體抗體 規(guī)格: 0.2ml

COMMD0  銅代謝結(jié)構(gòu)域蛋白0抗體 規(guī)格: 0.2ml

ERCC6L  發(fā)育相關(guān)蛋白ERCC6L抗體（乙醇致畸因子） 規(guī)格: 0.2ml

Corf83  號(hào)染色體開放閱讀框83抗體 規(guī)格: 0.2ml