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產(chǎn)品描述：
大鼠表皮角質(zhì)形成細胞提取物【Rat Skin: Normal Epidermal Keratinocytes Derivatives】
     大鼠表皮角質(zhì)形成細胞提取物培養(yǎng)大鼠表皮角質(zhì)形成細胞提取物是從大鼠原代表皮角質(zhì)形成細胞提取的，大鼠原代表皮角質(zhì)形成細胞從正常大鼠皮膚組織制備。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實驗的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。        cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA*鏈，以50ul總反應(yīng)體系進行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及0mg總RNA。68℃反應(yīng)0min 后終止RT反應(yīng)。利用x RT Buffer 運輸cDNA， μl cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證產(chǎn)品的質(zhì)量。        蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mM Tris, pH7.2, 50mM NaCl, mM EDTA, mM EGTA, % NP-40 , mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人血管組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, % SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。        潛在的應(yīng)用： <>已知基因的PCR克隆；<2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標(biāo)測序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學(xué)；<6>芯片研究與表達圖譜。
技術(shù)傳授:
凍存培養(yǎng)基
大鼠表皮角質(zhì)形成細胞提取物培養(yǎng)凍存細胞時必須使用的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基。
）細胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細胞的即用型*凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)化，可改善細胞活力以及解凍后的細胞復(fù)蘇效果。 
2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基，含0% DMSO，適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存。
培養(yǎng)細胞凍存方案
以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細胞凍存的一般流程。詳細的實驗方案，必須參閱針對具體細胞的產(chǎn)品說明書。 
.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細胞系。
2.凍存貼壁細胞時，利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細胞。
3.采用血球計數(shù)器、細胞計數(shù)儀按照臺盼藍拒染法或者使用 Countess®自動細胞計數(shù)儀測定總細胞數(shù)和活細胞百分比。根據(jù)所需活細胞密度，計算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約00-200×g的離心力將細胞懸液離心5至0分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動細胞沉淀。
注：離心速度和時間取決于細胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀，將其調(diào)整至該細胞適合的活細胞密度。
6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時，應(yīng)不時輕輕混合細胞，使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞，使溫度每分鐘大約降低  °C。或者，將裝有細胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。 
以下是大鼠表皮角質(zhì)形成細胞提取物培養(yǎng)的相關(guān)產(chǎn)品：

兔抗RPS27A多克隆抗體 英文名：Anti-RPS27A rabbit polyclonal antiboy 冷凍（-20℃） 避光

兔抗C99多克隆抗體 英文名：Anti-C99 rabbit polyclonal antiboy 冷凍（-20℃） 避光

兔抗EXT多克隆抗體 英文名：Anti-EXT rabbit polyclonal antiboy 冷凍（-20℃） 避光

兔抗C79B多克隆抗體 英文名：Anti-C79B rabbit polyclonal antiboy 冷凍（-20℃） 避光

兔抗KLR多克隆抗體 英文名：Anti-KLR rabbit polyclonal antiboy 冷凍（-20℃） 避光

兔抗C83多克隆抗體 英文名：Anti-C83 rabbit polyclonal antiboy 冷凍（-20℃） 避光

兔抗AH5多克隆抗體 英文名：Anti-AH5 rabbit polyclonal antiboy 冷凍（-20℃） 避光

兔抗C69多克隆抗體 英文名：Anti-C69 rabbit polyclonal antiboy 冷凍（-20℃） 避光

兔抗AK4 多克隆抗體 英文名：Anti-AK4 rabbit polyclonal antiboy 冷凍（-20℃）

兔抗RUNX多克隆抗體 英文名：Anti-RUNX rabbit polyclonal antiboy 冷凍（-20℃） 避光

兔抗C247多克隆抗體 英文名：Anti-C247 rabbit polyclonal antiboy 冷凍（-20℃） 避光

兔抗CKNC多克隆抗體 英文名：Anti-CKNC rabbit polyclonal antiboy 冷凍（-20℃） 避光

大鼠表皮角質(zhì)形成細胞提取物培養(yǎng)Trion X-00 曲拉通X-00 500ml  瓶

D-Biotin D--輔酶R-維生素H 58-85-5  20mg

Phenyl -Sepharose CL-4B 苯基-瓊脂糖凝膠 CL-4B 25mL  瓶

Delphinidin-3-O-Rutinoside 飛燕草素-3-O-蕓香糖苷 2026-59-4  mg

Maltol 麥芽酚 00g  瓶

kb plus DNA Ladder 00T  支

兔抗牛IgG-HRP ml  支

全血基因組DNA提取試劑系統(tǒng) 50ml  盒

透析袋MD25(3500D ) 5M  卷

Sarcosine 肌氨酸 00g  瓶

BCIP-NBT底物顯色試劑盒 25ml  盒

細胞可重發(fā)跟不可重發(fā)：
可以重發(fā)的情況有哪些？
（）細胞運輸途中遭遇的各種問題，細胞丟失、破損、漏液等，重發(fā)；
（2）凍存的細胞復(fù)蘇后，絕大多數(shù)細胞未存活，重發(fā)；
（3）存活的細胞靜置24小時后，絕大多數(shù)細胞未存活，重發(fā)；
（4）凍存的細胞復(fù)蘇后或存活的細胞靜置4小時后并且未開封，出現(xiàn)污染，重發(fā)；
（5）視具體情況而定。
大鼠表皮角質(zhì)形成細胞提取物培養(yǎng)出現(xiàn)問題，不予以重發(fā)的情況有哪些？
（）客戶造成細胞污染，不重發(fā)；
（2）客戶不正確操作致細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
（3）細胞狀態(tài)不好，未細胞培養(yǎng)前3天照片的，不重發(fā)；
（4）細胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理的，不重發(fā)；
（5）細胞收到2天內(nèi)，未告知，不重發(fā)；